提取时间为20min所得含量最高

2、糕点提取时间的中种考察

参考国标GB5009：28-2016一般性食品中样品提取时间，本试验对不同类别的添加糕点进行加标试验来考察样品提取时间对目标成分提取效率的影响，考察的剂含究提取时间分别为5min、10min、量测理方20min、定及30min、前处40min、法优50min、化研60min，糕点称取糕点、中种月饼、添加辣条样品各3份，剂含究精密加入混合标准使用液2.0mL，量测理方上机测定，定及得到4组分在不同提取时间的含量，结果见表2。结果显示，超声提取10min，4种目标组分的数值基本达到稳定，提取时间为20min所得含量最高，本次试验最终选择超声时间为20min。
 

3、蛋白沉淀剂加入量的考察

参考相关文献，本次试验考察蛋白沉淀剂(亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液)加入量对不同类别糕点在4组分中的影响，蛋白沉淀剂加入量分别为0mL、lmL、2mL、3mL、5mL，再沉淀1mL，因找不到同时含有这4组分的阳性样品，故试验采用的是阴性样品加标试验进行考察，称取糕点、月饼、辣条样品各3份，精密加入混合标准使用液2.0mL，按样品(无奶油蛋糕或面包、辣条、月饼)2g于50mL具塞离心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超声20min，冷却至室温，加219g/L亚铁氰化钾、106g/L乙酸锌溶液各2mL，涡旋混匀，于10000r/min离心5min，上清液转移至50mL容量瓶，残渣再提取一次，合并2次滤液，定容至刻度。

取15mL提取液，加10mL正己烷，涡旋5min，离心后，吸取下层过滤上机分析制备供试品溶液，上机测定，计算4组分在不同蛋白沉淀剂加入量所得含量，从表中可以看出，沉淀剂加入量对月饼影响最大，对辣条影响次之，对糕点影响最小，沉淀剂以加入各2mL为宜，对于加入沉淀剂后的提取液还浑浊的样品，可以在提取液中再加入各lmL沉淀剂，不会对结果造成显著差异。

4、净化方式的考察

（1）正己烷净化方式的考察

本次试验采用正己烷萃取1次、正己烷萃取2次、PRiMeI-ILBSPE柱三种净化方式对不同类别糕点4组分加标含量测定结果的影响，蛋白沉淀剂(亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液)加入量对不同类别糕点在4组分中的影响，蛋白沉淀剂加入量分别为0mL、lmL、2mL、3mL、5mL，再沉淀1mL，因找不到同时含有这4组分的阳性样品，故试验采用的是阴性样品加标试验进行考察，称取糕点、月饼、辣条样品各3份，精密加入混合标准使用液2.0mL，按样品(无奶油蛋糕或面包、辣条、月饼)2g于50mL具塞离心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超声20min，冷却至室温，加219g/L亚铁氰化钾、106g/L乙酸锌溶液各2mL，涡旋混匀，于10000r/min离心5min，上清液转移至50mL容量瓶，残渣再提取一次，合并2次滤液，定容至刻度。

取15mL提取液，加10mL正己烷，涡旋5min，离心后，吸取下层过滤上机分析制备供试品溶液，上机测定，计算4组分在不同蛋白沉淀剂加入量所得含量，从表中可以看出，沉淀剂加入量对月饼影响最大，对辣条影响次之，对糕点影响最小，沉淀剂以加入各2mL为宜，对于加入沉淀剂后的提取液还浑浊的样品，可以在提取液中再加入各lmL沉淀剂，不会对结果造成显著差异。上机测定，结果见图2，对大部分样品而言，正己烷萃取1次可降低样品基质效应，使样品检出含量变大，正己烷萃取2次，则会带走目标物质，PRiMeHLB小柱，对目标组分存在吸附，试验最终选择正己烷提取1次。

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