3.3.2 超氧阴离子清除能力的不同测定a.试剂配制Tris溶液：称取6.05gTris（三羟甲基氨基甲烷）用水溶解定容至500mL，得0.1mol/L的产地Tris溶液。0.05mol/LHCl溶液：量取4.29mL浓盐酸（36%～38%）用水溶解定容至1000mL水中，银柴氧化研究得0.05mol/LHCl溶液。胡黄活性10mmol/LHCl溶液：将0.05mol/LHCl溶液用水稀释5倍即得10mmol/LHCl溶液。酮含Tris-HCl缓冲液（pH8.2）：分别用0.1mol/L的量及Tris溶液和0.05mol/L的HCl溶液调pH为8.2即可。3mmol/L邻苯三酚溶液：称取0.0378g邻苯三酚（焦性没食子酸）用10mmol/LHCl溶液溶解定容至100mL，其抗得3mmol/L邻苯三酚溶液。不同现配现用，产地4h内有效。银柴氧化研究 b.实验步骤分别取Tris-HCl缓冲液4.5mL二组（A组为待测样品，胡黄活性B组为空白对照），酮含至于25℃水浴锅中保温20min，量及保温结束后在A组中加入5.0mL待测样溶液，其抗在B组中加入5.0mL待测样溶剂作为空白对照。不同分别在各组中加入0.3mL邻苯三酚溶液，迅速摇匀充分反应4min后加入0.2mLHCL溶液终止反应。在325nm处测定吸光度值，计算超氧阴离子清除，阳性对照为抗坏血酸。 c.计算方法
式中：ODA为加样品溶液的吸光度值； ODB为加乙醇水溶液的吸光度值。 4 结果与讨论4.1 不同产地银柴胡提取物黄酮含量采用紫外分光光度法测定了宁夏、内蒙及陕西三个产地的银柴胡提取物黄酮含量，银柴胡提取物黄酮含量测定结果如下图所示。
结果表明，宁夏、内蒙及陕西三个产地的银柴胡提取物黄酮含量存在显著差异，宁夏产地黄酮含量最高，为41mg/g，内蒙产地银柴胡提取物黄酮含量最低为21mg/g，陕西产地银柴胡提取物黄酮含量为33mg/mL，宁夏和陕西产地银柴胡提取物黄酮含量差异较内蒙而言较小。 4.2 不同产地银柴胡提取物的抗氧化能力4.2.1 不同产地银柴胡提取物ABTS自由基清除率测定各产地银柴胡提取物对ABTS自由基的清除率如图所示，由图中可知，三个产地银柴胡提取物对自由基的清除率呈现明显的剂量依赖关系，随着银柴胡提取物黄酮浓度的增加对ABTS自由基的清除率也逐渐增加。宁夏银柴胡提取物黄酮对ABTS自由基的半数清除浓度（IC50）为0.18mg/mL，陕西银柴胡提取物黄酮对ABTS自由基的IC50为0.22mg/mL，内蒙银柴胡提取物黄酮对ABTS自由基的IC50为0.31mg/mL，抗坏血酸的IC50为0.11mg/mL，内蒙产地银柴胡提取物黄酮ABTS自由基清除率最低，说明银柴胡提取物黄酮具有较好的清除ABTS自由基的能力，其中宁夏和陕西的银柴胡最好。
4.2.2 不同产地银柴胡提取物超氧阴离子清除率测定各产地银柴胡提取物对超氧阴离子基的清除率如图所示，由图中可知，三个产地银柴胡提取物对自由基的清除率呈现明显的剂量依赖关系，随着银柴胡提取物黄酮浓度的增加对超氧阴离子的清除率也逐渐增加。宁夏银柴胡提取物黄酮对超氧阴离子的半数清除浓度（IC50）为0.13mg/mL，内蒙银柴胡提取物黄酮对超氧阴离子的IC50为0.15mg/mL，陕西银柴胡提取物黄酮对超氧阴离子的IC50为0.24mg/mL，抗坏血酸的IC50为0.09mg/mL，说明银柴胡提取物黄酮具有一定的清除超氧阴离子的能力。
4.3 讨论野生银柴胡主要分布于干旱少雨的荒漠、半荒漠草原区，极耐干旱、耐贫瘠、耐寒，忌涝，近年来随着人们的过度采挖，银柴胡野生资源急剧减少，因此银柴胡的人工种植是替代野生资源的重要途径，目前人工种植基地主要集中在宁夏、内蒙古、甘肃、陕西等地，其中，宁夏作为银柴胡的主要道地产区，银柴胡的种植时间较早，规模较大。 银柴胡中含有的黄酮类成分具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等功效，周丽等通过超声乙醇提取银柴胡得到总黄酮含量在0.8%左右，本研究通过进一步的大孔树脂吸附纯化得到黄酮含量提高了约5倍左右，同时本文对于三个产地的银柴胡提取物黄酮类成分及体外抗氧化能力进行了对比研究，测得宁夏产地的黄酮类成分含量最高，陕西次之，内蒙产地较低，宁夏产地银柴胡提取物黄酮含量为41mg/g；比较了三种产地银柴胡提取物黄酮体外对ABTS自由基和超氧阴离子的清除能力，得到三种产地的银柴胡提取物黄酮均具有较好的体外抗氧化能力，其中宁夏产地抗氧化能力最强。综上所述，宁夏作为银柴胡道地产区之一其生产的银柴胡提取物黄酮含量最高，抗氧化能力最强，可作为一种天然抗氧化成分应用于食品中，具有广阔的市场前景，但其具体作用机制有待进一步研究，本文为银柴胡的种植及在食品方面的应用研究提供了参考。 声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联 相关链接：邻苯三酚，银柴胡，黄酮，三羟甲基氨基甲烷 |
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