准确取2～5g（精确至0.0001g）样品，加入1.0mL亚铁氰化钾溶液和1.0mL乙酸锌溶液，定饮摇匀，料中加水定容至10mL，甜蜜涡旋混匀，素糖赛蜜5000r/min离心5min，精钠取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，和安备用。法测
将标准系列溶液经0.22μm微孔滤膜过滤，分别注入液相色谱-串联质谱仪中，料中测定相应的甜蜜峰面积，以标准工作液的素糖赛蜜浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，精钠绘制标准曲线。和安
③试样溶液的法测测定
将试样溶液注入液相色谱-串联质谱仪中，以保留时间定性，同时记录峰面积，根据标准曲线得到待测液中3种添加剂的浓度。
定性判断：试样中目标化合物色谱峰的保留时间与标准色谱峰的保留时间一致，变化范围应在（±2.5%）之内。待测化合物的定性离子的重构离子色谱峰的信噪比应≥3（S/N≥3），定量离子的重构离子色谱峰的信噪比应≥10（S/N≥10）。
目标化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括一个母离子和两个子离子（甜蜜素为一个母离子和一个子离子），且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过规定的范围。
式中：x——样品中待测组分的含量（μg/kg）；
C——测定液中待测组分的浓度（μg/L）；
C0——空白中待测组分的浓度（μg/L）；
V——定容体积（mL）；
M——样品称样量（g）。
实验中考察选用0.05%氨水-甲醇、5mmol/L乙酸铵-甲醇、10mmol/L乙酸铵-甲醇作流动相，实验表明0.05%氨水-甲醇作为流动相三种目标物响应最高，10mmol/L乙酸铵-甲醇作流动相三种目标物响应最低。图2为1.0mg/L混合标准溶液在不同流动相中的响应值。文献报道中流动相选用盐溶液，如10mmol/L乙酸铵、甲酸铵-乙腈，本文所用仪器为WatersAcquityUPLC-XEVOTQD，若使用10mmol/L乙酸铵-甲醇作为流动相，在仪器Intellistart功能中并不能找到目标化合物的MRM，手动优化发现目标化合物MRM响应很低。若使用5mmol/L乙酸铵-甲醇作为流动相Intellistart功能中并可以找到目标化合物的MRM，但与使用0.05%氨水-甲醇作为流动相相比，离子响应较低，XEVOTQD在负离子模式下，碱性环境更有利于化合物去氢生成负离子，因而文中选用0.05%氨水-甲醇作为流动相。
样品不经净化处理，基质抑制效应明显，因此实验中考察用三氯乙酸溶液（1g/L）、PSA分散固相萃取、乙酸锌-亚铁氰化钾净化样品。三氯乙酸溶液是很好的蛋白沉淀剂，但三氯乙酸吸电子效应明显，不利于三种目标化合物脱氢电离。PSA固相吸附剂，与NH2相似的吸附剂，有两个氨基，比氨基柱更强的离子交换能力，弱阴离子交换（水溶性基质），用于去除有机酸、色素和金属离子。用PSA分散固相萃取可以很好的去除饮料中的去除有机酸、色素和金属离子，但它同时也会吸附部分糖精钠和安赛蜜（见图3），因而一般样品经过滤后直接测定糖精钠与安赛蜜含量，经PSA分散固相萃取后过滤测定甜蜜素含量，0.3～0.5gPSA用量可以得到较好的回收率。
2Zn2++［Fe（CN）6］4+=Zn2［Fe（CN）6］↓（白色），乙酸锌与亚铁氰化钾反应生成的氰亚铁酸锌沉淀来挟走或吸附干扰物质，这种澄清剂除蛋白质能力强，但脱色能力差。实验中考察沉淀剂的用量：分别用乙酸锌-亚铁氰化钾0.5～0.5mL、0.75～0.75mL、1.0～1.0mL、2.0～2.0mL、1.0～2.0mL（物质量之比1∶2）和2.0～1.0mL（物质量之比4∶1）处理5.0g样品，实验表明只有当氰亚铁酸锌含量达到0.00075moL时，且按照化学计量反应比例加入沉淀剂，三种化合物的回收率才较好（见图4），但过多的盐溶液进入UPLC/MS/MS系统会在锥空上沉积，影响电离效率，因而本实验选用沉淀剂用量为：乙酸锌0.0002moL，亚铁氰化钾0.0001moL。对其他含乳样品可以参考本实验选择合适的沉淀剂用量。
3种化合物工作标准曲线见表3，安赛蜜和甜蜜素在5～200μg/L范围内，糖精在20～200μg/L范围内，线性相关系数r＞0.995，20μg/L和200μg/L标准溶液连续进样6次，精密度为8.6%和5.4%，方法检出限（S/N=3）为0.2～10μg/kg，方法定量限（S/N=10）为0.6～30μg/kg，见表3。
3种化合物在自制奶茶中三个级别添加量的回收率为78.9%～95.7%，在某品牌果茶中三个级别添加量的回收率为80%～102%，回收良好。见表4。
测定5份定型包装饮料与5份自制奶茶均未检出3种添加剂。
本文建立UPLC/MS/MS法测定饮料品中的甜蜜素、糖精钠和安赛蜜的检测方法，即一般样品经过滤处理，检测样品中的糖精和安赛蜜的含量；经PSA分散式固相萃取后，检测样品中甜蜜素含量；含乳样品经乙酸锌-亚铁氰化钾去蛋白处理；用0.05%氨水-甲醇做流动相，负离子模式采集。与其他分析方法相比，操作简单，检出限低，重现性好，回收率良好，干扰小，避免甜蜜素衍生反应，消除样品基体抑制效应，适用于饮料样品中3种添加剂的测定。
声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系
相关链接：甜蜜素，安赛蜜，亚铁氰化钾，甲酸铵
相关文章：
安徽芜湖首个国家级知识产权公共信息服务平台获批运行广西横县不同地域茉莉花香气组分含量分析（三）浙江慈溪四轮驱动高分完成电子营业执照推广“答卷”掀起中国金属玻璃家具产业革命,行业资讯枯草芽孢杆菌中胞壁肽的分离纯化及其对芽孢的影响（一）福建福州开展秋季校园食品安全专项检查山西查处价格违法案件 退还用户4800余万元天能电力今年将投入10亿建光伏电站,行业资讯打击医美乱象 浙江宁波开展可用于医疗美容的医疗器械专项整治中国环境空气苯系物类挥发性有机物监测能力现状分析（二）北京朝阳开展2023年国家宪法日暨宪法宣传周系列宣传活动北京石景山：开展特种设备安全监督检查业务培训备孕能吃土豆了吗女性伟业计量第3届招商会议圆满举办，第4届火热招商中！玻璃机械分成哪几种类型 玻璃钢化炉分成哪些部分,行业资讯紫外线能穿透玻璃吗 什么玻璃能透过紫外线,行业资讯福建漳州：围绕民生领域查办案件4613件北京石景山：为荣获“北京市第一批商业秘密保护示范基地”称号企业授牌北京石景山：开展冰雪运动装备监督检查江西瑞昌：推行“触发式”监管 助力“3+N”产业体系怎样切割特厚的玻璃 用什么方法切割12mm厚的玻璃,行业资讯中国营养保健食品协会发布《T/CNHFA 001「新品」超标会中毒！腌制食品莫贪吃，快用亚硝酸钠家用快检试剂盒来检测「热卖推荐」四环素、沙拉沙星、克伦特罗等多种兽药标准物质现货供应，欢迎选购！江西赣州：保护“赣南脐橙”地理标志商标在行动维珍妮、天科染发膏等45批次化妆品不合格美国制订测定食品中亚硫酸盐浓度的新分析方法在家就能测——水质总硬度快检试剂盒（HR），快来学学怎么用？宁夏石嘴山：多举措开展广告监管工作上海青浦：全力打造消费维权新格局 示范领跑“满意消费长三角”物业“四舍五入”多收费 市场监管化纠纷解民忧「招商邀请」缘聚青岛·伟业计量首届巡回招商会议正式启动电饭煲中预浸泡对陈米饭气味特性影响及机制解析（二）致癌物超标20多倍？衣服禁用芳香胺染料，您中标了吗？黑龙江省开展摘“滤镜”换新灯专项行动福建多地开展食品安全宣传周系列活动「新品」喝水苦咸味？警惕氯离子超标！家用快检试剂盒安排上吉林公主岭：线上线下开展安全用药月宣传活动幕墙支撑密封材料的特点 幕墙玻璃的维护有何要点,行业资讯【新品推荐】CHO细胞DNA含量测定质控品重磅来袭，欢迎抢购！